Blots test, emplacement Blots & Dot Blots - immunodétection, Bio-Rad

blots test, comme leur nom l'indique, sont très simples occidentaux qui sont blots créés dans le but exprès d'optimiser ou le dépannage des conditions expérimentales. Ils sont habituellement produits par l'exécution de plusieurs voies d'une même lysat ou une solution de protéine purifiée sur un gel, et après le transfert à couper le transfert en bandes à tester individuellement.

Ils fournissent un moyen rapide et efficace de l'examen d'une gamme de dilutions d'anticorps ou des substrats de détection

Dot tarés et slot blots sont également une variation très utile sur le Western Blot typique. Ils ne nécessitent pas l'électrophorèse sur gel, donc il n'y a pas de séparation des protéines par la taille.

Au lieu de cela, le mélange de la protéine cible ou le lysat cellulaire est ajouté directement sur la surface de la membrane de nitrocellulose ou de PVDF. Les solutions de protéines peuvent être appliquées directement dans un petit volume, ou avec un collecteur de vide pour produire une grille ordonnée d'échantillons similaires à ceux observés sur la figure 14. Chaque point ou slot blot contiendrait des quantités connues de protéine cible ou un lysat cellulaire.

Une fois sec, dot blots et slot blots sont soumis aux mêmes étapes d'immunodétection utilisées pour un transfert de Western, à savoir le blocage, l'incubation d'anticorps, et la détection de la cible avec le substrat. taches grises et noires sur la figure ci-dessous indiquent quels échantillons sont positifs pour la protéine cible et correspondent approximativement aux bandes produites sur un transfert de Western.

Figure 14. Dot tarés et buvards à sous. Le point blots à gauche représentent une série de dilutions d'un échantillon, avec plus légers petits points correspondant à des concentrations plus faibles de protéine cible. Les blots à sous représentent un groupe d'échantillons aléatoires, l'intensité du signal correspond à la concentration de la protéine cible dans l'échantillon.

L'inconvénient principal de slot blots blots / de points est qu'ils ne fournissent pas d'informations sur le poids moléculaire. Ainsi, il est plus difficile de détecter des signaux faux positifs, ou de dire si des formes modifiées d'une protéine sont présents.