Chromatographie sur couche mince
La Chromatographie sur couche mince (CCM) est une technique utilisée très couramment dans la chimie de synthèse pour identifier des composés, la détermination de leur pureté et en suivant le déroulement d'une réaction. Il permet également l'optimisation du système de solvant pour un problème de séparation donnée. En comparaison avec Chromatographie sur colonne, il ne nécessite que de petites quantités du composé (
ng) et est beaucoup plus rapide aussi.
Comme phase stationnaire, une matrice de sol spécial finement (gel de silice, l'alumine, ou un matériau similaire) est revêtue sur une plaque de verre, un métal ou un film de matière plastique sous forme de couche mince (
0,25 mm). En outre, un liant comme le gypse est mélangé dans la phase stationnaire pour le faire coller mieux à la diapositive. Dans de nombreux cas, une poudre fluorescente est mélangée dans la phase stationnaire pour simplifier la visualisation plus tard (vert clair par exemple lorsque vous exposez à 254 nm lumière UV).
Préparation de la plaque
Ne touchez pas la plaque TLC sur le côté de la surface blanche. Afin d'obtenir une ligne de départ imaginaire, faire deux encoches de chaque côté de la plaque de CCM. Vous pouvez également dessiner une fine ligne avec un crayon. Ne pas utiliser un stylo. Pourquoi? La ligne de départ devrait être 0,5-1 cm du fond de la plaque.
Placez un capillaire de point de fusion et dans la partie bleu foncé de la flamme du brûleur Bunsen. Tenez-le jusqu'à ce qu'il ramollisse et commence à fléchir. enlever rapidement le capillaire de la flamme et tirer sur les deux extrémités à environ 2 à 3 fois sa longueur initiale. Si vous tirez le capillaire dans la flamme, vous aurez une « œuvre d'art », mais pas un bon observateur. Laisser le capillaire refroidir, puis briser au milieu. Assurez-vous que vous interrompez l'extrémité fermée sur l'un d'entre eux. Ne pas utiliser des gants lorsque vous tirez capillaires. Vous aurez le contrôle beaucoup mieux sans eux!
Voir le film comment tirer ici capillaires ici
Longue-vue de la plaque
L'extrémité mince de l'observateur est placé dans la solution diluée; la solution se lèvera dans le capillaire (forces capillaires). Touchez la plaque brièvement à la ligne de départ. Laisser le solvant à évaporer et place au même endroit. De cette façon, vous obtiendrez un concentré et spot. Essayez d'éviter des taches trop de matériel, parce que cela va se dégrader considérablement la qualité de la séparation (# 145; # 146 tailing;). Les taches doivent être assez loin des bords et les uns des autres aussi bien. Si possible, vous devez repérer le composé ou d'un mélange avec les matières premières et intermédiaires possibles sur la plaque. Ils servent de référence interne puisque chaque plaque de CCM est légèrement différente.
Le développement d'une plaque
Une plaque de CCM peut être développé dans un bécher ou un bocal fermé (voir photo ci-dessous). Placer une petite quantité de solvant (= phase mobile) dans le récipient. Le niveau de solvant doit être en dessous de la ligne de départ de la CCM, sinon les taches se dissoudre. Le bord inférieur de la plaque est ensuite plongée dans un solvant. Le solvant (éluant) se déplace jusqu'à la matrice par capillarité, le déplacement des composants des échantillons à différents taux en raison de leurs différents degrés d'interaction avec la matrice (= phase stationnaire) et la solubilité dans le solvant de développement. les solvants non polaires forceront les composés non polaires à la partie supérieure de la plaque, du fait que les composés se dissolvent bien et ne pas interagir avec la phase stationnaire polaire. Permettre au solvant de se déplacer jusqu'à la plaque jusqu'à ce que
Les composants, visibles comme des taches séparées, sont identifiés en comparant les distances qu'ils ont voyagé avec celles des matériaux de référence connus. Mesurer la distance de la ligne de départ vers le front de solvant (= d). Ensuite, mesurer la distance du centre de la place à la ligne de départ (= a). Diviser la distance le solvant déplacé de la distance du point individuel déplacé. Le rapport résultant est appelé Rf -valeur. La valeur doit être comprise entre 0,0 (spot n'a pas été déplacé de la ligne de départ) et 1,0 (spot déplacé avec front de solvant) et est sans unité.
Le Rf (= facteur de retardement) dépend des paramètres suivants:
- système de solvant
- absorbant (taille des grains, la teneur en eau, épaisseur)
- quantité de matériau repéré
- température
En raison du fait que toutes ces variables sont difficiles à maintenir constant, un composé de référence est généralement appliquée à la plaque ainsi.