Comment faire un frottis buffy coat
Buffy manteau / technique Microhematocrit
- pourquoi utiliser par centrifugaton augmentation de la concentration, suivie d'un examen au microscope optique et fluorescent, en utilisant plusieurs techniques de coloration pour visualiser les microbes?
Après centrifugation d'un anticoagulant (EDTA ou citrate) échantillon de sang entier, gouttes humides (1 goutte de sang
Borrelia (et probablement d'autres spirochètes?)
tache jaune au rouge-orange (ADN simple brin et ARN) avec Acridine Orange - exemples:
Trypanosoma
"La méthode est la Malaria QBC méthode la plus simple et la plus sensible pour le diagnostic des maladies suivantes.
Le paludisme babésiose la trypanosomiase (maladie de Chagas, la maladie du sommeil) filariose (Elephantiasis, Loa-Loa) Fièvre récurrente (borréliose)
Quelques références de recherche sont présentés ici. "
équipement de microscopie à fluorescence (abordable).
"Technique des anticorps fluorescents (FA), également connu sous le nom immunofluorescence, est une excellente méthode de diagnostic rapide. FA est facile à faire, sensible, spécifique et relativement peu coûteux. Il est extrêmement polyvalent. FA détecte et identifie les agents étiologiques de la maladie (directe FA
Description: purifié par affinité anticorps polyclonal de Borrelia burgdorferi faites chez la chèvre et marqué à l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC). Isolé à partir d'un pool de sérum de chèvre immunisés avec des cellules entières tuées de chaleur de Borrelia burgdorferi. L'anticorps est hautement spécifique de Borrelia burgdorferi. La réactivité croisée à Borrelia hermsii, Borrelia coriaceae et Borrelia anserina a été minimzed par adsorption importante d'affinité. Le produit est sous forme lyophilisée. Chaque lot est testé pour assurer la spécificité et la cohérence de lot à lot en utilisant des années KPL en interne test ELISA.
« Une caméra peut être monté sur le phototube pour l'enregistrement d'images numériques. Commutation entre la caméra et l'oculaire est inutile en raison du 50/50 diviseur de faisceau pratique. Pour l'affichage et la gestion des images de fluorescence enregistrées numériquement, nous proposons l'EURO-Picture efficace programme. La norme EUROSTAR Ill plus est équipé d'une lampe halogène pour la microscopie optique transmise normale en champ clair et fond noir et peuvent être mis à niveau pour le contraste de phase « .
SO - en guise de conclusion avec des équipements modernes en utilisant une source lumineuse de faible demande d'énergie et très longue durée de vie, il n'est plus LED extrêmement coûteux pour obtenir un système de microscope qui peut faire la microscopie à fluorescence, plus la lumière / phase de contraste / fond noir.
Le défi est de trouver un microscope au microscope approprié et wellfunctoning CAMERA qui peut se connecter facilement et être alimenté par un ordinateur via USB!
Il doit avoir une résolution assez élevée et non le moins doit être PHOTOSENSIBLES ASSEZ pour permettre de prendre de belles photos et / ou vidéos comme illustré. Au cours de la microscopie vidéo peut fonctionner et copier tous les vues, les instantanés et videoclips du film brut peut être extrait plus tard. Cela rend beaucoup plus facile de trouver des microbes, même un spirochète très mince / mince, qui est soit teinté d'orange-rouge par Acridine Orange (pas cher, voir photos ci-dessus) ou vert avec des anticorps spécifiques Borrelia FITC marqués (voir ci-dessous). - photographier un spirochète vert unique contre un fond très noir appareil photo très exigeant, je ne peux malheureusement pas photographier un spirochètes vert mince sur un fond noir avec mon appareil photo, malgré il est juste possible de voir une telle au microscope!
caméras microscope abordables comme la série DinoLite se décline en plusieurs versions différentes; Je maintenant utiliser le AM4023X DinoLite pour mon vieux microscope Leitz Laborlux III anno 1957, parce que je n'ai pas le top trinoculaire pour elle; mais - malgré qu'il a une résolution plus élevée de 3 Mpixels - il est malheureusement pas tout à fait aussi la lumière raisonnable que mon ancien appareil photo Bresser Microocular II (photo), le très gros problème avec mon ancien microcaméra Bresser est qu'il a seulement une résolution VGA (640x480 pixels ) et pire encore, il n'y a que les pilotes 32 bits pour ce dispositif 32 bits, à savoir aucun pilote peut le faire fonctionner sur un système Windows (Vista-64 ou 7) 64 bits, donc je devais acheter un nouvel appareil photo après décalage à un système informatique Windows7!
Borrelia burgdorferi fluorescent spécifique directe (FITC) de coloration immunitaire.
Notez que les Borrelia burgdorferi ci-dessus spirochètes ne semblent pas très spiralées
(Dans TBRF images les spirochètes semblent souvent plus que spiralé B. burgdorferi).
Mais tous ceux qui prétendent que Borrelia burgdorferi spirochètes a donc et tant de bobines
et est toujours d'une certaine longueur et l'épaisseur
- et dire que ce que j'appelle spirochètes ne ressemble pas à spirochètes Borrelia idéal à partir d'images
- ont évidemment pas passer des années à étudier la morphologie et
mouvements de spirochètes vivants dans eux-mêmes! microscope
Une fièvre récurrente immunocompétent patients Borrelia sera généralement obtenir de 10-30 rechutes, avant que la maladie « burn out » lorsque le système immunitaire atteint le contrôle de la prolifération microbienne. probablement de même pour la plupart des patients infectés par Borrelia burgdorferi?
fusées de symptômes (attaques) diminuent progressivement en gravité (par rapport à la quantité de spirochètes qui pénètre dans le sang et augmenter complément réaction en cascade (vous devriez mesurer les produits fendus du complément si disponible) et la tempête de cytokines pro-inflammatoires (TNF => fièvre, IL-1, IL-6.) et en fin de cours, aussi les intervalles entre les rechutes augmente, aussi longtemps que l'infection est sous contrôle (par le système immunitaire et / ou antibiotiques) alors nouvellement formés spirochètes ne sont pas autorisés à se reproduire chaque semaine plus .
Cyclicité a également été noté par Willy Burgdorfer.
31 mois est environ 2. années!
« D'après notre expérience, il est encore possible de détecter les bactéries pathogènes s'il y a moins de 10 bactéries dans un millilitre d'échantillons de sang natif centrifugés. En comparaison, le seuil pour la détection de la borréliose de Lyme avec PCR, qui est actuellement considéré comme le plus sensible, mais ne peut être fait dans des laboratoires spécialement équipés, est compris entre 40 et 100 germes par ml, en plus, autant que possible amorces spécifiques à des sous-souches différentes devraient être disponibles « .
« Nous avons conclu que la tache AO est simple, rapide et plus sensible que les méthodes Romanowsky pour détecter les cas de spirochétémie bas niveau. »
« Dans des études de laboratoire qui ont utilisé Borrelia burgdorferi comme modèle, nous avons détecté spirochètes à des concentrations aussi faibles que 10 organismes / mm3. Alors que le nombre de lectures positives évaluées au moyen de films de sang colorés a chuté de manière significative à des dilutions ci-dessous 3.263 organismes / mm3. E une plus grande sensibilité de la technique QBC est importante dans les zones où Borrelia est endémique ».
Note 10 / mm3 = 10 / microlitre, à savoir correspondent à 500 organismes par examen goutte de sang; nombre de spirochètes en RF est beaucoup, beaucoup plus élevé que dans la borréliose de Lyme, où> 7 organismes par goutte est « beaucoup »!
L'application de la coloration orange acridine pour quantifier un faible niveau de Babesia divergens parasitémie. (1974)
Note: Il a été proposé par certains pour se déplacer / renommer Babesia microti à Theileria microti. sur la base d'une relation plus étroite génétique de ce groupe pour Theileria, Babesia que d'autres spp.
Theileria infectent les lymphocytes et les globules rouges, et peut former multinucléées schizontes intralymphocytic. En savoir plus sur Theileria dans ce PDF.
La variation des souches faire des sérologies commerciaux qui sont basés sur une seule souche non fiable, à savoir un risque élevé de patients infectés localement ne montrant que résultat d'anticorps positif ou faux négatif limite, si un kit d'anticorps commercial est utilisé avec des souches étrangères de régions éloignées, qui sont trop différents dans l'expression antigénique des variantes locales.
2. Bien que l'apparition d'une infection Babesia dans les tiques européennes se trouve généralement faible, avec des tests de PCR en cours (
SSI NI (ni CDC) ont pris la peine de INFORMEZ-NOUS DANS LEURS RAPPORTS D'ESSAI EXACTEMENT QUI BABESIA ET ANTIGENES PCR PRIMER ILS utilisés dans le test NÉGATIF!
INFORMATION NECESSAIRE POUR LAISSER « DOUTES FONDES » QUE LES RÉSULTATS POURRAIENT ÊTRE TOUT FAUX NÉGATIF, car elles prennent SOUCHES mal à RESSEMBLANCE FAIBLE SOUCHES LOCAL!
ENQUÊTE SUR LE CAS CORRECTE ET SURVEILLANCE DE COMMANDED OCCURRENCE DE TOUS LES INFECTIONS TIQUES EST NÉCESSAIRE, MIEUX VAUT TARD QUE JAMAIS!
- en utilisant les méthodes de diagnostic les plus sensibles très bien sûr!
Un danois disant: « Besoin enseigne une femme nue pour fabriquer des vêtements ». parce que je ne l'ai pas obtenir de l'aide de diagnostic approprié moi-même par mes collègues danois, qui a refusé les tests décrits dans la littérature publiée, je fus forcé de « do-it-moi » et de trouver une autre façon, avec l'aide de bons collègues à l'étranger, et l'expérience gagné de cela, m'a amené à faire un petit projet de recherche sur les patients ayant des antécédents similaires et les symptômes.
NOTE: Toutes les études de traitement pour effet du traitement antibiotique ont été effectuées que sur des patients avec test direct négatif pour Borrelia. Alors bien sûr, il y a peu ou pas de bénéficier d'un traitement antibiotique dans ces essais!
Si nous voulons vraiment évaluer les résultats d'un traitement antibiotique pour l'infection à Borrelia active, il faut être certain à 100% que le patient a vraiment une INFECTION Borrelia active!
. nous devons être en mesure de détecter la Borrelia (antigène) infection de manière fiable avec des méthodes optimisées directes (journal, microscopie, culture, PCR) avant l'inscription des patients dans une étude de traitement. parce que l'inscription de nombreux cas avec « post-Lyme » symptômes persistants (lésions nerveuses) avec la volonté de test d'antigène négatif bien sûr biaiser les résultats vers NO CERTAINS EFFET en proportion du groupe qui n'a plus cycle d'activité (hebdomadaire, mensuel) - précédent Des études comme Klempners est pseudoscience, ne sont pas utiles à personne, plutôt est très nocif pour ceux qui vraiment infectés, qui sont niés treament qui peuvent les aider, vraiment!
« Les tests ultérieurs sur des échantillons de sérum des deux patients [Babesia EU1] a montré la réactivité IFA à B. divergens mais pas d'antigènes de B. microti, le sérum du patient italien a également été testé pour la réactivité aux antigènes WA1 et a été négative. »
À titre de comparaison: Le titre danois des patients à l'antigène de test inconnu était de 1: 125.
« Le taux de co-infection de ces agents pathogènes a été jugée assez faible (Borrelia spp./Anaplasma phagocytophilum - 4,2%, 1/24;. Borrelia spp spp./Babesia - 4,2%, 1/24). Toutefois, en raison la prévalence accrue de Borrelia spp. dans des tiques Ixodes Ricinus en Pologne et l'émergence récente de nouvelles infections transmises par les tiques, il est nécessaire d'évaluer soigneusement le risque réel d'infection humaine par plusieurs agents pathogènes en utilisant des outils de diagnostic plus sensibles et fiables.
Ce rapport est le premier d'infection humaine par Babesia spp. en Pologne qui a été confirmé par des techniques moléculaires avec une homologie de 98,9% à B. divergens ou Babesia EU1. "
« Co-infections humaines avec les agents pathogènes Borrelia spp. Et A. phagocytophilum avec le plan clinique (érythème migrans) et sérologiquement (séroconversion) ont confirmé la borréliose de Lyme, ainsi que anaplasmose asymptomatique (sérologie positive ou PCR pour A. phagocytophilum) ont été décrits en Pologne [ 12, 17] et d'autres pays [23, 25]. Néanmoins, les quelques rapports précédents de ces co-infections indiquent que la maladie qui en résulte est plus grave et prolongée [39 *]. Depuis les années 1950, deux espèces de Babesia, B . divergens de bovins en Europe et B. microti de rongeurs dans les parties des États-Unis, ont été montrés du nord-est du centre-ouest et supérieur pour infecter l'homme [26]. l'espèce B. microti, B. divergens, B. odocoilei-like, et EU1 Babesia sont connus pour être répandu dans I. ricinus tiques à travers l'Europe, y compris la Pologne [9, 15, 33, 43] « . [Aucune description de cas clinique]
Tant que génotypage il pas encore généralement avaiable nous pour le diagnostic, nous ne saurons jamais avec certitude quel type de Borrelia (s) le patient a été infecté avec!
Nous avons besoin d'un accès à la culture pour Borrelia (au moins dans les cas qui ne reçoivent pas bien sur tretment standard pour Borrelia), ainsi que les co-infections dans les cas suspects de Borreliose Lyme tardive ou chronique persistante, le diagnostic spécifique de l'antigène de Borrelia soutiendra nécessité le traitement et l'aide dans le choix du traitement.
Le point clé dans le diagnostic des maladies infectieuses ACTIVE est facile, simple à savoir le Réapparition DE LA CLINIQUE MOTIF DE LA RECHUTE CYCLIQUES. QUI NOUS PERMET DE DETECT SPIROCHETES DANS LE SANG PAR MICROSCOPIE AU COURS DE LA PREMIÈRE JOURNÉE DE CHAQUE PÉRIODE ACTIVE FLARE. dans le sang pris à d'autres moments spirochètes ne sont généralement pas détectables!
Si le patient a un motif de rechute « hebdomadaire » spirochètes peuvent être détectés en 1 par 10 jours du cycle (10% de chances de prise de chance, alors que le risque de manquer des prises est de 90%); chez les patients sur un cycle mensuel 1 par 30 jours, la chance de la prise de la chance est de 3%, alors que le risque de manquer des prises est de 97%) si le clinicien ne dépasse pas le délai de l'échantillonnage pour la détection directe pour arriver le premier jour d'une nouvelle fusée !
L'antigène dans mes cas de projet a réagi avec un anticorps Borrelia ajouté qui avait été absorbé pour les espèces de TBRF et testé par le producteur à être spécifique pour Borrelia burgdorferi sensu lato (KPL).
Tout d'abord quand on sait quelle souche les patients ont obtenu et peut se comparer à l'état clinique, il deviendra possible d'évaluer la signification clinique des différentes souches de Lyme Borrelia!
Présence de Babesia spp. Rickettsia spp. et Bartonella spp. dans Ixodes Ricinus dans les parcs publics de Bavière, en Allemagne.
=> Rapport de Babesia venatorum (EU1): Babesia divergens trouvés dans les tiques du parc bavarois était de 25: 1
à savoir les humains et les animaux de compagnie en visite ce parc de la ville est à 25 fois le risque relatif plus élevé de contracter une infection par Babesia EU1 par rapport à Babesia divergens, qui est, si elles obtiennent une infection Babesia, puisque moins de 1% des tiques examinées ont été trouvés infectés par Babesia espèces, le risque général de acquerront infection Babesia est encore assez faible!
». Les taux de prévalence Pathogène ont été évalués par la chaîne de la polymérase détection et séquençage réaction dans les quêtes tiques, individuellement pour les adultes et dans les piscines de 10 pour les nymphes. En plus de trouver des micro-organismes correspondant à symbiotes, nous avons trouvé des taux élevés de prévalence de B. burgdorferi (32% des femmes adultes et 10% des nymphes) faible à modéré de ceux Anaplasma phagocytophilum (
1%). tachetée groupe de fièvre Rickettsia spp. (
6%). Babesia sp. EU1 (
1%). Bartonella birtlesii (0,1%), et Francisella tularensis (! 1%).
Nos résultats étendent la connaissance de la répartition géographique de ces agents pathogènes endémiques et émergentes et soutiennent la conclusion que les tiques sont des vecteurs importants de micro-organismes pathogènes dans les forêts de banlieue. De plus, les tiques co-infection avec plusieurs agents pathogènes a été trouvé à se produire fréquemment, ce qui pose un sérieux défi pour le diagnostic et le traitement approprié. L'incrimination de ces agents pathogènes dans les pathologies potentiellement graves nécessite une surveillance généralisée pour évaluer le risque d'infection, ce qui facilite le diagnostic et le traitement, ainsi que la sensibilisation locale des maladies transmises par les tiques. » Et
"La prévalence de Babesia spp. A atteint 2,4% et l'identification au niveau de l'espèce a révélé B. venatorum (1,7%) et B. microti (0,4%)."
Cette souche est décrite comme Babesia-gibsoni comme et est connu pour une réaction croisée dans le test de sérologie avec Babesia gibsoni, alors que les patients avec Babesia WA1 tester généralement négatif sur le test d'anticorps pour B. microti!
- ref ci-dessus. du parc de la ville allemande, décrit la recherche 1 Babesia gibsoni-like. peut-être est étroitement lié à appeler WA1 comme, depuis WA1 est également B. gibsoni-like?
« Deux des patients ayant des titres élevés à WA1 avaient un cours de maladie prolongée, l'une avec des enzymes hépatiques élevées. »
LE POINT CLÉ.
Neg. test d'anticorps et test PCR négatif ne peuvent pas être utilisés pour exclure les infections Babesia, en particulier quand PAS ringforms peuvent être détectés par microscopie simple, qui reste « l'étalon-or » test!
frottis sanguins négatifs minces et épais ne peuvent pas être utilisés pour gouverner o
QBC méthode quantitative buffy-coat.
Remarque: Le QBC est comme méthode d'écran rapide et plus sensible, mais si elle est positive par QBC examens normaux de frottis sanguins minces et épais devrait également être fait, pour l'identification des souches optimale
« Nous concluons que le QBC est plus rapide, avec une sensibilité élevée, et se révélera utile dans le dépistage clinique et épidémiologique, en particulier lorsque la parasitémie est faible. »