Endotoxines et glucane Informations de référence
QU'EST-CE ENDOTOXIN?
L'endotoxine est un composant de la paroi cellulaire chez les bactéries à Gram négatif. Plus précisément, l'endotoxine est une composante majeure de la partie extérieure de la membrane externe de la paroi cellulaire Gram négatif. Endotoxine est une pyrogènes très forte et est considéré comme une toxine bactérienne.
L'endotoxine est un lipopolysaccharide (LPS). Il y a deux parties principales à cette molécule, le polysaccharide et le lipide A. Le polysaccharide est non toxique. Il est hydrophile et fait face vers l'extérieur à partir de la membrane cellulaire et dans le milieu dans lequel les bactéries se développe. Il contient des antigènes majeurs des bactéries et est la cible la plus importante de bactéries Gram-négatives pour la réponse immunitaire. Chaque espèce de bactéries à Gram négatif rend sa propre molécule de LPS unique. La partie de polysaccharide de la molécule est très variable.
Le lipide A est le composant toxique du LPS. Le lipide A est composé d'un disaccharide (glucosamine) contenant des groupes phosphate et les acides gras. La partie acide gras de la molécule est très hydrophobe et fait face vers l'intérieur vers le milieu de la membrane externe. Cela provoque LPS à se comporter de la même manière que, ce qui phospholipides composent la plupart des membranes. Il y a beaucoup moins de variabilité entre les bactéries présentes dans la composition de lipide A et se trouve principalement dans les chaînes d'acides gras.
Pourquoi test endotoxine? Endotoxine provoque des réactions indésirables chez l'homme. Si endotoxines sont présents dans des médicaments, des appareils ou d'autres objets placés à l'intérieur du corps, ils peuvent causer des maladies. Les médicaments pris par voie orale ne doivent pas nécessairement être testé pour endotoxine. Les bactéries ne ont pas besoin d'être en vie pour endotoxines toxiques. En fait, endotoxine dans des bactéries vivantes est moins toxique que lorsque les bactéries sont mortes à cause endotoxines des cellules mortes est libérée, ce qui augmente la dose apparente.
Endotoxine est relativement stable à la chaleur. Il survivra à des procédures communes de désinfection et de stérilisation à base de chaleur. Par conséquent, les éléments stériles ne sont pas nécessairement sans endotoxine.
INFORMATIONS CONNEXES
Pyrogène: A pyrogène est tout composé qui donne lieu à une réaction pyrogène, qui est caractérisée par de la fièvre. Endotoxine est le pyrogènes naturel le plus puissant et un risque potentiel pour la santé des humains. À fortes doses, les endotoxines peuvent provoquer un choc et la mort.
Toxines bactériennes: Il existe trois classes de toxines bactériennes. Endotoxines sont nommés « endo » parce qu'ils font partie de la paroi cellulaire et non libéré en grandes quantités à moins que la cellule est détruite. Les endotoxines sont faites que par des bactéries Gram-négatives. Exotoxines sont activement sécrétés par les bactéries alors qu'ils sont en vie et en pleine croissance. Entérotoxines sont sécrétées dans l'intestin et causer la diarrhée et la dysenterie.
REGLEMENTAIRE DE TEST ENDOTOXIN
La FDA approuve les limites pour les méthodes d'exposition et de test pour endotoxine. L'USP, en collaboration avec le Parlement européen et JP, affiner les méthodes d'essai pour les tests d'endotoxines.
Il y a plusieurs grands documents réglementaires qui décrivent comment les médicaments, les appareils, le dialysat, l'eau et d'autres substances à tester pour endotoxine.
a la priorité sur les valeurs calculées Une limite indiquée pour un médicament officinal.
- pour les drogues par voie parentérale: 5,0 UE / kg. Supposons un adulte de 70 kg humain, à moins que l'administration de médicaments aux enfants.
- pour les drogues injectée par voie intrathécale: 0,2 UE / kg.
- limite pour les dispositifs: 20 EU / dispositif
- limite pour les dispositifs utilisés intrathécale: 2,15 UE / dispositif
QU'EST-CE GLUCAN?
Glucanes sont une classe de polysaccharides. Plus précisément, ils sont des chaînes de glucose qui sont habituellement ramifiés et parfois réticulé. Ils font partie de la paroi cellulaire des champignons (levures et moisissures), les algues, certaines bactéries et les plantes, où ils contribuent la résistance mécanique et de l'intégrité au mur.
EFFETS DE GLUCAN
(1 → 3) -ß-D-glucanes sont des immunomodulateurs. Remèdes populaires de nombreuses cultures utilisent des champignons pour aider la guérison. On croit que l'effet de guérison est attribuable aux glucanes dans les champignons. Il existe plusieurs types de (1 → 3) -ß-D-glucanes, et les propriétés physiques et chimiques de la molécule affectent ses activités biologiques. (1 → 3) -ß-D-glucanes sont connus pour se lier à et activer les macrophages, les neutrophiles, les monocytes et les cellules NK. Ils sont soupçonnés de se lier à une variété de cellules, par exemple, les cellules endothéliales et les fibroblastes.
Parmi les effets biologiques causés par glucanes est la production de cytokines, qui sont des éléments importants dans l'inflammation. D'autres activités associées à glucanes sont la synthèse de l'oxyde nitrique, l'activation de la cascade du complément, et l'activation des lymphocytes et des macrophages.
Il existe des preuves provenant d'études animales qui glucane et endotoxines peuvent agir en synergie pour augmenter la réponse inflammatoire. Dans certaines études, cette synergie a été utilisé pour traiter le cancer.
Pour les fabricants de médicaments et appareils, (1 → 3) -ß-D-glucanes est considéré comme un contaminant. Bien que la FDA ne réglemente pas ce contaminant immunostimulante, il peut être source de préoccupation à cause de deux raisons. Un, la présence de (1 → 3) -ß-D-glucanes peut donner une lecture faussement élevée dans le test LAL pour endotoxines. Cela pourrait produire et le résultat Out-Of-spécification. Deux, (1 → 3) -ß-D-glucanes peuvent contribuer à des effets indésirables chez les patients.
Les sources communes de glucanes expérimentés par les fabricants de médicaments et des instruments sont des filtres fabriqués à partir de matières cellulosiques, des matières premières d'origine végétale, des enclos contenant du coton, des sucres, des matières premières d'origine naturelle, des produits de cellulose (par exemple, des éponges), etc.
Des exemples de produits trouvés pour contenir la contamination glucane comprennent des produits sanguins (l'albumine, les protéines de plasma, les préparations d'immunoglobulines, des facteurs de coagulation), des médicaments, des produits oligonucléotidiques de collagène, des préparations de solution saline, les préparations de glucose, et de l'eau pour injection.
Il existe deux approches de tests pour glucane. Premièrement, le procédé de soustraction, utilise deux dosages pour une endotoxine, dont l'une a une substance de blocage pour réduire la réponse du dosage de glucane dans l'échantillon. La différence entre les deux résultats est proportionnelle à la quantité de glucane présente. Deux, une mesure directe de (1 → 3) -ß-D-glucanes. Un essai de mesure directe est spécifique de (1 → 3) -ß-D-glucanes. Il est quantitative, spécifique, et beaucoup plus précis que la méthode de soustraction. Les seules versions disponibles de ce test sont appelées Glucatell ® et Fungitell ® et les deux sont disponibles qu'à partir Associates of Cape Cod, Inc. Pour plus d'informations cliquez sur les liens ci-dessous.
PROBLÈMES TEST
INHIBITION
L'inhibition est caractérisée par une commande positive du produit (CPP) étant récupéré à moins de 50% dans un essai chromogène ou turbidimétrique ou une défaillance du 2 # 955 PPC à coaguler. L'inhibition peut également provoquer un résultat inférieur à ce qu'il devrait être. Il y a plusieurs causes possibles:
- Le pH. Le test LAL fonctionne le mieux entre pH 6,0 à 8,0. Plus le pH de la solution de test est de cette gamme, plus l'inhibition sera vu. Vérifier le pH de l'échantillon pour vous assurer qu'il est dans la bonne plage. Si l'échantillon est proche, plus de Pyrosol, un agent tampon, contribuera à amener l'échantillon dans la bonne fourchette. D'autres échantillons nécessiteront la neutralisation.
- solvants organiques. Les solvants organiques inhibent le dosage par inhibition de l'activité des enzymes. Diluer l'échantillon avec de l'eau.
- Précipités. Précipités influera négativement sur le dosage chromogénique parce que le trajet de la lumière sera bloquée. Diluez l'échantillon.
- Sel. Si la concentration est trop élevée, les enzymes de l'essai seront incapables de travailler efficacement. Diluez l'échantillon.
RENFORCEMENT
L'amélioration est caractérisée par un contrôle de produit positif (CPP) étant récupéré à plus de 200% dans un essai chromogène ou turbidimétrique. La plupart des tests de gel caillot ne peut pas détecter l'amélioration. Dans l'essai d'inhibition d'amélioration, l'amélioration dans un essai gel-caillot est supposé lorsque le produit 0,25 # 955 caillots standard. La mise en valeur peut également causer des résultats à signaler que plus que ce qu'ils devraient être. Il y a plusieurs causes possibles: