Faire un stock à long terme des bactéries
introduction
Chaque fois que vous transformez avec succès une culture bactérienne avec un plasmide ou chaque fois que vous obtenez une nouvelle souche bactérienne que vous voulez faire un stock à long terme de cette bactérie. Les bactéries peuvent être stockés pendant des mois et des années si elles sont stockées à -80 ° C et dans un pourcentage élevé de glycérol.
- Solution à 40% de glycérol
- Jour / culture de la nuit
- flacons cryogéniques / 1,5 ml tube microfuge
- Choisir une colonie unique du clone une assiette et faire croître une nuit dans le milieu liquide sélectionnable approprié (3-5ml).
- Ajouter 0,5 ml de glycerol à 40% dans H2 O dans un flacon cryogénique.
- Ajouter 0,5 ml d'échantillon de la culture de bactéries à stocker.
- Vortexer doucement le flacon cryogénique pour assurer la culture et de glycérol est bien mélangé.
- Vous pouvez également mélanger par pipetages.
- Du côté de la liste flacon toutes les informations pertinentes - partie, vecteur, la souche, la date, chercheur, etc.
- Gel stock de glycérol dans de l'azote liquide et conserver dans un congélateur -80 ° C.
- Ce sera également un bon moment pour enregistrer les informations de contrainte et enregistrer l'emplacement.
- Bien qu'il soit possible de faire un stock à long terme des cellules en phase stationnaire, idéalement votre culture devrait être en phase de croissance logarithmique.
- Certains antibiotiques dans le milieu doivent être enlevés d'abord comme ils sont censés être toxiques au fil du temps, ex) tetracycline. Pour ce faire, tourner la culture vers le bas et remettre en suspension dans un même volume de milieu LB droite.