La révolution biotechnique PCR et clonage de gènes exprimés, l'apprentissage des sciences à Scitable

« Le dogme central, énoncé par Crick en 1958 et de la clé de voûte de la biologie moléculaire depuis, est susceptible de prouver une Telle est la conclusion hérétique mais incontournable simplification considérable. Découlant des expériences faites au cours des derniers mois dans deux laboratoires dans le États Unis."

Découverte de transcription inverse

Au cours des années 1960, Baltimore, Temin et Mizutani étaient chacun par les questions sans réponse sur la façon dont les virus ARN transformé des cellules saines dans les cellules tumorales. Ils savaient que la transformation se produit lors des cellules saines ADN incorporé de l'environnement extérieur (dans ce cas, l'ADN du virus de la tumeur de l'ARN) dans leurs génomes. Mais comment une cellule eucaryote pourrait incorporer l'ADN d'un virus qui ne possède pas l'ADN?

Howard Temin avait émis l'hypothèse de l'existence d'une enzyme capable de fabriquer de l'ADN à partir d'ARN dès 1964 ( « Dogme Central Renversée, » 1970). Mais, comme cela est le cas avec toutes les hypothèses scientifiques, la communauté de recherche est restée sceptique sur cette proposition jusqu'à ce que les publications 1970 essuyés que le scepticisme loin. À ce moment-là, la course était d'identifier l'enzyme responsable de la création de l'ADN à partir d'ARN. Aujourd'hui, cette enzyme est appelée transcriptase inverse.

Fait intéressant, dans leurs journaux révolutionnaires, les deux ensembles de scientifiques n'identifient en fait la transcriptase inverse, mais ils ont fourni des preuves claires et concluantes de l'existence d'une enzyme qui a utilisé l'ARN viral comme matrice pour la synthèse de l'ADN. Les expériences soutenant l'existence de cette ADN polymérase ont produit des données qui ont révélé les éléments suivants:

• La polymérase ADN n'incorporé désoxyribonucléotides, non ribonucléotides, dans son produit.
• Le produit lui-même « comportés » comme l'ADN - en d'autres termes, il était sensible au traitement par désoxyribonucléases mais pas RIBONUCLÉASES.
• L'ARN lui-même était le modèle, comme indiqué par le fait que le traitement des virions avec des ribonucléases détruit la capacité de la polymerase d'incorporer des nucléotides marqués de manière radioactive.

Bien que la motivation pour les deux études était de mieux comprendre le rôle des virus dans certains cancers, il y a aussi une suggestion dans les journaux que les scientifiques étaient au courant, au moins à un niveau intuitif, qu'il y avait des implications beaucoup plus à leurs conclusions. Comme Temin et Mizutani (1970) écrit: « Ce résultat aurait de fortes implications pour les théories de la carcinogenèse virale et, peut-être, pour les théories du transfert d'information dans d'autres systèmes biologiques. »

Il n'a pas fallu longtemps pour les scientifiques d'isoler la transcriptase inverse responsable des conclusions de Baltimore (Verma et al. 1972). Une autre équipe (Banque et al .. 1972), puis utilisé l'enzyme pour synthétiser l'ADN à partir d'ARNm dans un tube à essai pour la première fois. (Que l'on appelle ADN complémentaire qui en résulte est appelée ADNc). Les deux équipes ont utilisé des ARNm de globine, ou des ARNm qui codent pour des polypeptides de l'hémoglobine du sang, afin de démontrer que la transcriptase inverse ne en fait la synthèse de l'ADN à partir de matrices d'ARNm. En outre, les équipes ont également constaté que la réaction fonctionne le mieux dans l'abondance de séquences courtes composées entièrement de nucleotides de thymine connues comme amorces d'oligo (dT). Sachant que la plupart des ARNm eucaryotes ont une chaîne de nucléotides d'adénine - également connu comme une queue poly (A) - à leur extrémité 3 ', les scientifiques ont prédit que la synthèse d'ADNc, il faudrait des amorces Oligo (dT), ou qu'il serait à moins être rendu plus efficace par la présence de ces amorces.

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