Le Dot Blot, Innova Biosciences

Le Dot Blot

Une méthode simple de détection mais efficace

dot blots sont très semblables à Western blots en ce sens qu'elles impliquent l'utilisation d'anticorps pour identifier une protéine qui a été lié à une membrane. Ils ne nécessitent cependant pas la séparation des protéines par électrophorèse sur un gel; l'échantillon d'essai est simplement repéré sur la membrane puis détectée.

En raison de l'absence d'une étape de séparation des protéines, des dot blots ne peuvent pas être utilisés pour déterminer la masse moléculaire d'une protéine ou de discriminer entre les différentes formes de protéines (par exemple clivés ou protéines phosphorylées). buvardages au lieu de points sont pratiques pour estimer la concentration en protéines dans les préparations brutes telles que surnageant de culture tissulaire ou ascite, pour déterminer si un système de détection à base d'anticorps fonctionne efficacement, ou pour identifier une concentration d'anticorps approprié pour un transfert de Western.

Les principales étapes d'un essai traditionnel Dot Blot sont les suivantes:

Utilisation des dot blots pour estimer la concentration en protéines

Grâce à repérer une protéine purifiée dans une série de concentrations connues à une membrane, d'un dot-blot peut être utilisée pour estimer la concentration d'une protéine cible dans un échantillon d'essai. La concentration de protéine dans l'échantillon de test peut être extrapolée à partir de la dilution en série de la protéine purifiée.

Figure 1. Le côté gauche de la membrane montre une dilution en série de la protéine purifiée, tandis que le côté droit contient trois dilutions différentes de l'échantillon d'essai. La dilution en série peut être utilisée pour estimer la concentration de la protéine dans l'échantillon de test.

Utilisation des dot blots pour évaluer un système de détection à base d'anticorps

Utilisation des dot blots pour identifier une concentration d'anticorps approprié

Les avantages de l'approche directe sont les suivantes:

La liaison non spécifique est évitée car les anticorps secondaires ne sont pas utilisés
Multiplexage est possible avec des anticorps de la même espèce
Plus rapide car il n'y a pas d'étape d'incubation d'anticorps secondaire et donc moins d'étapes de lavage
La qualité des données est améliorée grâce à une simplification de dosage

Les avantages de la foudre-Link® comprennent:

Il est rapide et facile à utiliser
Il ne nécessite que 30 secondes de délais sur les mains
Il n'y a pas de séparation étapes impliquées pour vous récupérer 100% de votre anticorps ou protéines
Vous pouvez étiqueter aussi peu que 10 ug à un gramme ou plus!