L'acido TACHES
L'acido TACHES
Certaines espèces bactériennes ont des lipides inhabituels (acide mycolique) dans leurs parois cellulaires. Cette substance rend la paroi cellulaire très cireuse et impénétrable par des solutions aqueuses de tache.
A la fin du 19ème siècle, Koch et Ehrlich introduit simultanément une méthode de coloration de la tuberculose Mycobacterium précédemment indétectable. Modifications de Ziehl Neelsen et produit la solution carbol-fuchsine couramment utilisé qui nécessite de la vapeur pour entraîner la tache. (Le point de fusion de l'acide mycolique est de 56 o C). Muller et Chermock modifiés carbol-fuchsine pour une utilisation à la température ambiante par addition d'un (agent mouillant) tensio-actif. Une solution d'acide-alcool élimine les taches de la plupart des éléments cellulaires et de tissus. L'acide mycolique, cependant, résiste à la pénétration de cet agent de différenciation, en laissant les bactéries acido-rouges sur un fond incolore. Bleu clair vert ou un groupe méthylène est utilisé comme contre-colorant pour aider à la localisation de matériel cellulaire sur le spécimen. La tache rapide d'acide est utilisé en routine sur des échantillons d'expectorations pour le diagnostic préliminaire de tuberculose active.
Faire un mince frottis bactérien sur une lame pour chaque organisme fourni. Vous aurez surtout travailler le M. Smeg. avec la boucle. Il sera utile d'ajouter de l'eau ansée. Faire un coulisseau d'un échantillon mélangé par addition d'une boucle à la fois. NE PAS OUBLIER DE LA CHALEUR FIX!
Si vous pouvez voir la substance sur la surface de la boucle ou glisser, votre frottis sera trop épais. Les taches ne peuvent pas pénétrer ou rincer des échantillons épais M. Smeg. est ramifiée bactéries « supérieures »; les cellules sont difficiles à séparer.
Inonder la lame avec fuchsine phéniquée (3-4 gouttes) et placer sur un bain d'eau bouillante pendant 5 minutes, en ajoutant tache que les bords commencent à s'évaporer. Essayez de ne pas couler tache dans l'eau bouillante. Un sou morceau de taille de serviette en papier placé directement sur le frottis peut aider à tenir le colorant sur le frottis.
Retirer du bain et laisser refroidir. Rincer à l'eau distillée et sécher doucement avec du papier absorbant. Laisser la lame refroidir.
Rincer serviette en papier dans l'évier et ramasser à la fin de la classe
Retirer le satin excès en inclinant la lame et ruisselant-alcool d'acide au-dessus pendant 30 secondes.
Cette étape de pré-colorisation arrête l'action de fuchsine phéniquée et élimine l'excès de colorant.
Rincer à l'eau distillée et sécher doucement.
Arrête l'action de rinçage de colorant, buvard maintient l'étape suivante de dilution. Une pression trop élevée dans buvard brisera la diapositive.
Différencier les organismes en inondant la lame avec l'alcool acide et laisser reposer pendant deux minutes.
Rincer à l'eau distillée et sécher doucement.
Rinçage arrête l'action de l'acide-alcool.
Inonder la lame avec le bleu de méthylène pendant au moins une minute.
M. luteus est un coccus non AF dans des paquets,
M. Smeg. est AF +, et sont de minuscules, des tiges ramifiées.
Rincer et sécher au buvard. Observer.