Les cellules compétentes pour la transformation, Sigma-Aldrich
Cliquez ici pour revenir au Guide de biologie moléculaire.
Contexte
Raisons de la transformation
Le phénomène de la transformation naturelle a permis à des populations bactériennes à surmonter de grandes variations dans la dynamique des populations et relever le défi de maintenir le nombre de la population lors des changements environnementaux difficiles et extrêmes. Au cours de ces conditions, certains genres bactériens libèrent spontanément l'ADN des cellules dans l'environnement libre d'être repris par les cellules compétentes. Les cellules compétentes répondent également aux changements de l'environnement et de contrôler le niveau d'acquisition de gènes par le processus de transformation naturelle.
Figure 1: Représentation schématique de la transformation dans des bactéries
Compétence des bactéries
Toutes les bactéries sont capables d'absorber l'ADN exogène de leur environnement. L'approche pratique pour acquérir des cellules compétentes est de rendre les cellules bactériennes en utilisant des produits chimiques ou artificiellement compétentes des impulsions électriques.
- induction chimique de compétence comprend les étapes suivantes:
- le refroidissement des cellules en présence de phosphate de calcium (catalogue Numéro 50552) pour les rendre perméables
- incubation avec de l'ADN
- un traitement de choc thermique à 42 ° C pendant 60-120 secondes qui provoque l'ADN de pénétrer dans les cellules
Remarque: pour supporter le traitement de choc thermique, il est important les cellules utilisées sont dans la phase de croissance logarithmique
- En variante, les cellules bactériennes sont rendues perméables en les soumettant à des impulsions électriques, un processus connu comme l'électroporation.
Sigma-Aldrich propose une large gamme de cellules chimiquement compétentes et les cellules électrocompétentes. Choisir le bon produit pour vous avec notre guide de sélection.
Applications de transformation
- de faire des copies multiples de l'ADN
- dans les procédures de clonage
- à exprimer de grandes quantités de protéines et d'enzymes
- dans la génération de banques d'ADNc
- dans les études de liaison d'ADN
Exigences de réaction de transformation typique
Les matériaux nécessaires et le protocole détaillé de transformation se trouvent ici.
Calcul de l'efficacité de la transformation
L'efficacité de transformation est définie comme étant le nombre de transformants générés par pg d'ADN de plasmide superenroulé utilisé dans la réaction de transformation.
L'efficacité de transformation est calculée en utilisant la formule ci-dessous:
Nombre de colonies sur la plaque (df)
Quantité d'ADN plaquées (ng)
Facteurs influant sur l'efficacité de la transformation
Comparaison de la transformation et Transfection
Applicable aux bactéries
Applicable aux cellules eucaryotes *
matériel génétique exogène est repris par des bactéries compétentes
le matériel génétique exogène est introduit dans les cellules eucaryotes
Les bactéries peuvent être compétentes soit chimiquement ou par électroporation
Le matériel génétique exogène est soit intégrée dans le génome ou est dégradé
Transformation permet l'expression de copies multiples de l'ADN résultant dans de grandes quantités de protéine ou d'une enzyme qui ne sont pas normalement exprimés par des bactéries
* Les cellules eucaryotes qui subissent des changements cellulaires et deviennent malignes par une prolifération accrue sont également appelées cellules « transformées ». Cette transformation est due à dysrégulation au gène, l'ARNm et / ou le niveau de protéines et ne ressemble pas à la transformation dans les bactéries.