Nucleic Acid Blotting
blot d'acide nucléique est une technique bien établie pour la localisation d'une région génomique, le gène ou une autre séquence d'intérêt à partir d'un mélange complexe d'ADN ou d'ARN. La première méthode buvard a été nommé d'après son inventeur, le biologiste britannique Edwin Southern.
Southern blot est utilisé pour détecter une séquence dans un mélange d'ADN, et un transfert de Northern détecte une séquence dans un mélange d'ARN. Southern Blot et du Nord sont les deux techniques de transfert d'acides nucléiques les plus courants.
- Southern blot peut être utilisé dans la cartographie des gènes et a des applications telles que la détection de grandes réarrangements du gène / deletions et les grandes expansions de répétition trinucléotidique.
- Northern Blot permet la mesure de l'expression génique, par exemple dans des études de recherche en ce qui concerne la différenciation, la morphogenèse et des anomalies génétiques.
Blotting implique la séparation électrophorétique des acides nucléiques dans un gel, transfert des composants séparés sur une membrane, et la détection de séquences spécifiques par sondage de la membrane. Le transfert et l'immobilisation sur la membrane font les acides nucléiques disponibles pour les sondes utilisées pour la détection, qui ne pénètrent pas facilement dans le gel.
D'autres techniques telles que la réaction en chaîne par polymérase (PCR) ont remplacé buvard dans de nombreuses applications qui nécessitent la détection ou la quantification sensible des séquences d'acides nucléiques dans des mélanges complexes. Malgré cela, le transfert de Southern a encore ses avantages, par exemple pour déterminer la position des séquences dans les grands fragments, la détection des réarrangements chromosomiques, ramassant des séquences apparentées ayant une homologie inférieure, et déterminer le nombre de copies du gène.
Buvard se compose de plusieurs étapes. Pour assurer le succès, le travail en arrière de manière systématique - faire en sorte que l'étape de détection fonctionne sur les matières premières avant gels courant et le transfert d'acides nucléiques sur la membrane.
En transfert de type Northern, il faut prendre grand soin d'éviter la dégradation de l'ARN par RNases omniprésentes.