Préparation des plaques d'agar

Précédent ◈ Suivant

Croissance et Contrôle des Souches bactériennes

des plaques Luria-Bertani (LB) avec l'antibiotique approprié pour la sélection seront préparés pour les transformations de placage.

NOTE: la gélose LB a été préparé pour vous; les informations sur les médias est inclus ici, donc vous saurez le contenu.
Recette pour Luria-Bertani (LB) gélose (par litre):
1% de Bacto-Tryptone 10 g =
0,5% d'extrait de levure 5 g =
85 mM NaCl = 5 g
1,5% de Bacto Agar = 15 g

* Ajuster le pH à 7,0 avec du NaOH et porter à 1 L; stériliser à l'autoclave pendant 20 minutes à 121 ° C à 15 psi
** médias autoclave est toujours refroidi à 50-60 ° C avant l'addition d'antibiotiques et des sels qui sont inactivées ou précipité par autoclavage; tenant la gélose à cette température empêche figement

Technique stérile

PROTOCOLE (travail en équipe)

Etiqueter les fonds de 4 boîtes de Petri avec le type d'agar et le type / concentration antibiotique; également mettre le numéro de la date et de l'équipe. Les fonds sont étiquetés parce que les couvercles peuvent facilement se séparer; En outre, les plaques sont généralement traitées inversé.

Avant de commencer, assurez-vous retirer ses gants et tirez les cheveux.
  1. Stack 4 boîtes de Petri (en haut et à droite)
  2. Allumez le gaz à mi-chemin et la lumière brûleur Bunsen avec l'attaquant
  3. Swirl grand flacon de LB-agar maintenu à 50-60 ° C pour bien mélanger le contenu
  4. Transfert
100 ml de LB-agar dans une fiole stérile et ajouter le bouillon antibiotique approprié dans un rapport 1: 1000 (1 pi d'antibiotique pour chaque ml de milieu); mélanger en remuant doucement mais il faut éviter de créer des bulles et de garder les milieux stériles
*** Utiliser une technique stérile - ne pas contaminer les médias ***
  • En utilisant une technique stérile, verser 20 à 25 ml de LB-agar dans une boîte de Petri (assez pour couvrir le fond de la cuvette)
    • Travailler rapidement pour verser les plaques; l'agar commence à coaguler en 5 minutes avec le ballon à la température ambiante
    • L'empilement des plaques tout en versant économise de l'espace de banc et est réalisée en soulevant la pile de 3 assiettes vides par le couvercle du fond plus plat. Agar est versé dans la boîte de Petri et la pile est remplacée; déplacez votre main sur le second couvercle et lifte la pile à nouveau de verser le deuxième plat d'agar; répéter jusqu'à ce que toutes les plaques dans la pile sont versées
    • Des bulles sur la surface du support peuvent être éliminés par passage de la flamme rapidement sur les bulles
  • Éteignez le gaz!
  • Pour tout support restant dans la poubelle et rincer à l'eau RO flacon
  • Laissez les plaques reposer à température ambiante jusqu'à ce qu'ils soient congelées (30-45 minutes) et de stocker dans le plastique et inversés à 4 ° C

    • Nous tenons à remercier New England Biolabs pour leur généreux soutien de ce cours de laboratoire

    Articles Liés

    Précédent ◈ Suivant